Rios Rios, Oscar Jhian GibranChávez Montenegro, Víctor Elías11/19/201911/19/20192019https://hdl.handle.net/20.500.14414/15030The diseases produced by avian adenovirus Type 4 (FAdV-4) are transmitted vertically and horizontally causing great economic losses in the poultry sector, that is why there is the need to carry out a process of standardisation of a Polymerase chain in reaction (PCR) to detect and quantify our virus of interest. To this end, in the present investigation, it was carried out in three (03) phases: The first consisted in the preparation of the internal reference material where the DNA was extracted, from a culture of EB66 cells, measuring its quantity of the Amplicon through the Fluorometer Qubit 2.0. The second phase was to standardize conventional PCR, in this phase we proceeded to the selection of the specific primers (Primer´s), these were HHS *-2, HHS *-3 and HHS *-4; The test of its temperature gradient was carried out based on the Q5 PCR Kit® High-Fidelity 2X Master, followed by the test of concentration of primers, the test of sensitivity being 100, 3% for the three sets of primers and the test of specificity resulting in 46.15%, 100% and 91.67% respectively. The third phase consisted of standardizing PCR in real time, in this phase the sets of primers HHS *-3 (0.25 umol/L) were used with 107 viral copies, successive dilutions were performed with different concentrations of viral copies from the standard HHS7 to HHS0, making Use of the LightCycler Equipment® 480 SYBER Green I Master and the Rotor Gene 6000 Real-Time PCR, which gave us an accuracy and correlation coefficient of Pearson (R2) greater than 99%, detecting up to a concentration of amplicon ≥ 1pg/ul.Las enfermedades producidas por adenovirus aviar tipo 4 (FAdV-4) se trasmiten en forma vertical y horizontal causando grandes pérdidas económicas en el sector avícola, es por ello que existe la necesidad de llevar a cabo un proceso de estandarización de una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para detectar y cuantificar nuestro virus de interés. Para ello en la presente investigación se procedió a realizarlo en tres (03) fases: La primera consistió en la preparación del material de referencia interna en donde se extrajo el ADN, a partir de un cultivo células EB66, midiendo su cantidad del amplicón a través del Fluorómetro Qubit 2.0. La segunda fase fue estandarizar la PCR convencional, en esta fase se procedió a la selección de los cebadores (Primer´s) específicos, éstos fueron HHS*-2, HHS*-3 y HHS*-4; se realizó la prueba de su gradiente de temperatura basándose en el kit de PCR Q5® High-Fidelity 2X Master, seguido se realizó la prueba de concentración de cebadores, la prueba de sensibilidad siendo el 100% para los tres sets de cebadores y la prueba de especificidad obteniendo como resultado el 46.15%, 100% y 91.67% respectivamente. La tercera fase consistió en estandarizar PCR en tiempo real, en esta fase se usó el sets de cebadores HHS*-3 (0.25 umol/L) con 107 copias virales, se realizó diluciones sucesivas con diferentes concentraciones de copias virales desde el estándar HHS7 hasta HHS0, haciendo uso del equipo de LightCycler ® 480 SYBER Green I Master y el equipo Rotor Gene 6000 Real-Time PCR, los cuales nos dieron una exactitud y un Coeficiente de correlación de Pearson (R2) mayor al 99%, detectando hasta una concentración de amplicón ≥1pg/ul.spainfo:eu-repo/semantics/openAccessCebadores (primers)copias viralessensibilidadinfo:eu-repo/semantics/other