Sagastegui Guarniz, William AntonioArregui Ramos, Diego Alfonso2023-10-242023-10-242021https://hdl.handle.net/20.500.14414/19023El presente trabajo de investigación tuvo como objetivo caracterizar la Transición Epitelio Mesenquimal (TEM) en líneas celulares de cáncer colorrectal resistentes a 5-fluorouracilo (5-FU). Se utilizaron líneas celulares HCT116 y SW480 resistentes a 5-FU obtenidas en el trabajo previo de Tesis I; inmunofluorescencia por microscopía confocal, Western Blotting y Reacción en Cadena de la Polimerasa en tiempo real con Transcripción Reversa (RT-qPCR) para evaluar los niveles de expresión proteica y génica respectivamente, de marcadores epiteliales y mesenquimales; Wound Healing Assay en la determinación del potencial migratorio y análisis de correlación génica in silico utilizando herramientas bioinformáticas. Los análisis morfológicos por inmunofluorescencia mostraron que los grupos resistentes a 5-FU exhibieron disminución de E-cadherina, aumento de Snail, Vimentina en forma de haces y mayor β-catenina nuclear en concordancia con una menor expresión génica y proteica de marcadores epiteliales (E-Cadherina y Claudina-3), y aumento de marcadores mesenquimales, Vimentina y Slug. HCT116 resistente a 5-FU exhibió una elevada capacidad migratoria en comparación con el grupo parental, con el mayor porcentaje (48%) de reducción del área de la herida luego de 36 horas. Finalmente el análisis de correlación génica in silico muestra una posible relación entre los niveles de expresión del transportador ABCC1 y componentes de las vías de señalización Wnt/β-catenina y JAK/STAT. Se concluye que la resistencia adquirida al 5-FU puede inducir TEM (Transición Epitelio-Mesenquimal) en células de cáncer colorrectal, y ser responsable de las características de malignidad y progresión de la enfermedad.ABSTRACT The present study aimed to characterize the Mesenchymal Epithelial Transition (TEM) in colorectal cancer cell lines resistant to 5-fluorouracil (5- FU). Cell lines HCT116 and SW480 resistant to 5-FU obtained in the previous work of Thesis I were used; immunofluorescence by confocal microscopy, Western Blotting and Real-time Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (RT-qPCR) to evaluate the levels of protein and gene expression, respectively, of epithelial and mesenchymal markers; Wound Healing Assay in the determination of migratory potential and in silico gene correlation analysis using bioinformatics tools. Morphological analyzes by immunofluorescence showed that the resistant groups to 5-FU exhibited a decrease in E-cadherin, an increase in Snail, Vimentin in the form of bundles and a higher nuclear β-catenin in accordance with a lower gene and protein expression of epithelial markers (E -Cadherin and Claudin-3), and increased mesenchymal markers, Vimentin and Slug. HCT116 resistant to 5- FU exhibited a high migratory capacity compared to the parental group, with the highest percentage (48%) reduction in wound area after 36 hours. Finally, the in silico gene correlation analysis shows a possible relationship between the expression levels of the ABCC1 transporter and components of the Wnt / β-catenin and JAK / STAT signaling pathways. It is concluded that acquired resistance to 5-FU can induce TEM in colorectal cancer cells, and be responsible for characteristics of malignancy and disease progression.application/pdfesinfo:eu-repo/semantics/openAccessCáncer colorrectal. Transición epitelio-mesenquimal. 5- fluorouracilo. Quimioresistencia. ATP-binding casstteinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesishttps://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.01.05