Estandarización y validación de la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa Nested Múltiple para el diagnóstico de HTLV-1

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dc.contributor.advisorLUJAN VELASQUEZ, Manuela
dc.contributor.authorSERRANO SEGURA, Kevin Osnar
dc.date.accessioned5/23/2019 12:59
dc.date.available5/23/2019 12:59
dc.date.issued2019
dc.descriptionIn Peru, the existence of a normative diagnostic algorithm is unknown, it is assumed that it is similar to HIV, therefore a multiple nested PCR test was standardized and validated for the diagnosis of HTLV-1 in proviral DNA samples of reference material of the MT-2 cell line. The test was validated with proviral DNA samples from whole blood, it was determined in 70 samples characterized by serology, its sensitivity and analytical specificity, veracity and accuracy in comparison with the immunoblot test (gold standard). The results of the validation showed a limit of detection of 0.5 ng of DNA per reaction of 25 μL of the Pol and LTR gene and an accuracy with a 100% detection rate for 0.4, 0.5 and 0.6 ng of DNA. In addition, in comparison with an Immunoblot test (INNOLIA) considered a reference test for our study, the multiple nested PCR obtained 97% sensitivity, 100% specificity, a positive and negative predictive value of 97.5 and 99.9% respectively and a kappa match factor of 0.97. The standardized method (multiple nested PCR) in this study is suitable and valid for the diagnosis of HTLV-1 in whole blood samples and can be implemented in the diagnosis algorithm of HTLV in the National Reference Laboratory of VTS-HIV / AIDS and to resolve the indeterminate results for the confirmatory diagnosis of children under 18 months with a high sensitivity and specificity._x000D_ Key words: HTLV-1, nested PCR, sensitivity, specificityes_PE
dc.description.abstractEn el Perú se desconoce la existencia de un algoritmo normativo de diagnóstico, se asume que es similar al del VIH por ello se estandarizó y validó una prueba de PCR nested múltiple para el diagnóstico de HTLV-1 en muestras de ADN proviral de material de referencia de la línea celular MT-2. Se validó la prueba con muestras de ADN proviral a partir de sangre total, se determinó en 70 muestras caracterizadas por serología, su sensibilidad y especificidad analítica, veracidad y precisión en comparación con la prueba de inmunoblot (gold estándar). Los resultados de la validación mostraron un límite de detección de 0.5 ng de ADN por reacción de 25 μL del gen Pol y LTR y una precisión con una tasa de detección 100% para 0.4, 0.5 y 0.6 ng de ADN. Además, en comparación con una prueba de Inmunoblot (INNOLIA) considerada prueba de referencia para nuestro estudio, la PCR nested múltiple obtuvo un 97% de sensibilidad, 100% de especificidad, un valor predictivo positivo y negativo de 97.5 y 99.9% respectivamente y un factor de concordancia kappa de 0.97. El método estandarizado (PCR nested múltiple) en este estudio es idóneo y valido para el diagnóstico de HTLV-1 en muestras de sangre total y puede ser implementado en el algoritmo del diagnóstico de HTLV en el Laboratorio de Referencia Nacional de VTS-VIH/SIDA y resolver los resultados indeterminados para el diagnóstico confirmatorio de los niños menores de 18 meses con una alta sensibilidad y especificidad.es_PE
dc.description.uriTesises_PE
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/20.500.14414/12575
dc.language.isospaes_PE
dc.publisherUniversidad Nacional de Trujilloes_PE
dc.relation.ispartofseriesTesis;T-4038
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccesses_PE
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/pe/es_PE
dc.sourceUniversidad Nacional de Trujilloes_PE
dc.sourceRepositorio institucional - UNITRUes_PE
dc.subjectHTLV-1es_PE
dc.subjectPCR nestedes_PE
dc.subjectsensibilidades_PE
dc.titleEstandarización y validación de la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa Nested Múltiple para el diagnóstico de HTLV-1es_PE
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesises_PE
thesis.degree.disciplineMicrobiología y Parasitologíaes_PE
thesis.degree.grantorUniversidad Nacional de Trujillo.Facultad de Ciencias Biólogicases_PE
thesis.degree.levelTítulo Profesionales_PE
thesis.degree.nameBiólogo Microbiólogoes_PE
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Tesis de Microbiología y Parasitología