Aislamiento y selección de cultivos nativos de Bacillus sp. productores de proteasas a partir de compost, Trujillo – Perú.
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Date
2017
Authors
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Publisher
Universidad Nacional de Trujillo
Abstract
Las proteasas alcalinas, son un grupo fisiológica y comercialmente importante, utilizadas primordialmente como aditivos en detergentes y procesamiento de alimentos. El objetivo de esta investigación fue, aislar y seleccionar cultivos nativos de Bacillus sp. productores de proteasas a partir de compost de la Estación Experimental de Bioquímica Aplicada, de la Universidad Nacional de Trujillo, Perú, Para ello, se recolectó compost como muestra, enriquecida con una solución de Caseína al 1%, y se realizó un tratamiento térmico (80 °C durante 15 minutos). Para aislar los Bacillus nativos, se realizaron diluciones seriadas, y de las dos últimas se sembró 0.1 mL por superficie en placas con Agar Caseína e incubaron a 37 °C durante 24 a 48 horas. Los cultivos bacterianos seleccionados fueron colocados en biorreactores de sistema agitado conteniendo Caldo Caseína a temperatura ambiente (23 °C – 25 °C), y cada 24 horas (0, 24, 48, 72, 96, 120 y 144 h), se determinó la producción de proteasas extrayendo 8 mL de muestra de cada biorreactor y se centrifugó. Al sobrenadante separado, se cuantificó la cantidad de proteasas producidas en relación al tiempo de incubación, midiendo la caseína residual, y se determinó la actividad enzimática de las proteasas mediante el Método de Sharmin y Rahman. De los 23 cultivos bacterianos aislados, se seleccionaron a 02, Cultivo FGM-02DL y Cultivo FGM-17DL, por presentar un diámetro de halo de hidrólisis de 3.3 cm y 3.7 cm, respectivamente. Estos cultivos presentaron colonias con un tamaño de entre 3 a 4 mm, de forma redonda, elevación convexa, bordes irregulares, aspecto seca como vidrio esmerilado, color beige – beige claro, y microscópicamente son bacilos Gram (+), con esperas esféricas y de posición central. El análisis estadístico de las unidades enzimáticas promedio (UE/mL) de los Cultivos FGM-02DL y FGM-17DL, demostró que no existe diferencia significativa (p>0,05), lo que permite concluir que ambos cultivos bacterianos seleccionados tienen la misma capacidad hidrolítica sobre la caseína. Palabras clave: Proteasas, Bacillus, caseína, capacidad hidrolítica.
Description
Alkaline proteases are a physiologically and commercially important group, used primarily as detergent additives and food processing. The objective of this research was to isolate and select native Bacillus sp. Protease producers from compost of the Experimental Station of Applied Biochemistry, National University of Trujillo, Perú. For this purpose, compost was collected as a sample, enriched with a 1% casein solution, and a thermal treatment (80 °C for 15 minutes). To isolate the native Bacillus, serial dilutions were made, and 0.1 mL per surface were plated on Casein Agar plates and incubated at 37 ° C for 24 to 48 hours. The selected bacterial cultures were placed in stirred system bioreactors containing Casein Broth at room temperature (23 ° C - 25 ° C), and every 24 hours (0, 24, 48, 72, 96, 120 and 144 h) was determined the production of proteases by extracting 8 mL of sample from each bioreactor and centrifuged. To the separated supernatant, the amount of proteases produced in relation to the incubation time was measured by measuring the residual casein and the enzymatic activity of the proteases was determined by the Sharmin and Rahman method. Of the 23 isolated bacterial cultures, 02, Culture FGM-02DL and Culture FGM-17DL were selected, as they had a halo diameter of hydrolysis of 3.3 cm and 3.7 cm, respectively. These cultures had colonies with a size of 3 to 4 mm, rounded, convex elevation, irregular edges, dry appearance as frosted glass, beige - light beige, and microscopically Gram (+) bacilli, with spherical wavelengths and Position. Statistical analysis of the average enzyme units (EU / mL) of FGM-02DL and FGM-17DL cultures showed no significant difference (p> 0.05), which leads to the conclusion that both selected bacterial cultures have the same hydrolytic capacity over casein.
Keywords
Proteasas, Bacillus, caseína, capacidad hidrolítica