Eficacia de la remoción de compuestos fenólicos de un sistema acuoso residual por la peroxidasa de brassica napus l. "nabo" inmovilizada en coronta de zea mays "maíz"
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Date
2009
Authors
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Publisher
Universidad Nacional de Trujillo
Abstract
Este estudio fue realizado con el objeto de determinar la eficacia de la remoción de compuestos fenólicos de un sistema acuoso residual por la peroxidasa de Brassica napus L. “nabo” inmovilizada en coronta de Zea mayz “maíz”. Para ello, la peroxidasa (POD) EC 1.11.1.7 fue extraída del zumo de B. napus L. precipitada en frío con alcohol etílico al 70%, y sometida a electroforesis y cromatografía con carboximetil celulosa, con gradiente de elusión de buffer acetato 0,005 M pH 4,4 y buffer acetato 0,25 M pH 5,2 con un cambio de gradiente del mismo buffer de 0,5 M pH 5,2. La electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) reveló cuatro bandas enzimáticas, la cromatografía de intercambio iónico reveló un pico con elevada actividad enzimática, en la fracción eluída sin gradiente, y dos pequeños picos con baja actividad enzimática en las fracciones 102-107 y 116-119. El extracto enzimático sin purificar mostró poca estabilidad térmica, y su actividad cae notoriamente a 50ºC. La enzima total purificada mostró un KM de 12,8 mM y velocidad máxima de 0,105 para guayacol y un KM de 2,22 mM y velocidad máxima de 1,095 para peróxido de hidrógeno. En tanto la fracción cromatográfica eluída sin gradiente, mostró un KM y Velocidad máxima de 10,52 mM – 0,54 y 5 mM y 0,606 para guayacol y peróxido de hidrógeno respectivamente. El pH óptimo de la enzima total purificada fue de 6 y de 7 para la fracción cromatográfica sin gradiente y además presentan una buena estabilidad a este pH. Respecto al proceso de inmovilización, Se encontró, que la proteína ligada es de aproximadamente 7 mg/g de soporte con una producción de acoplamiento del 79%. El rendimiento de inmovilización de la POD de nabo varía entre un 46,36 y 47,65%, la cantidad de actividad enzimática no inmovilizada estuvo alrededor del 24,35% con una pérdida de la actividad enzimática durante este proceso de inmovilización alrededor del 29%. Respecto a la capacidad de remoción del fenol por las peroxidasas presentes en un extracto crudo de nabo, se encontró que la POD inmovilizada presenta un 74% y la POD soluble un 66,66%, siendo más eficaz la POD inmovilizada en la remoción del fenol.
Description
This study was carried out with the objective of determining the effectiveness of the removal of phenolic compounds from a watery residual system by the peroxidase of Brassica napus L. “turnip” immobilized in cor of Zea mays “corn”. For this, the peroxidase (POD) EC 1.11.1.7 was extracted from the juice of B. napus L. precipitated in cold with ethyl alcohol to 70% and subjected to electrophoresis and chromatography with carboxymethyl cellulose, with gradient of etution of buffer acetate 5 mM – pH 4,4 and buffer acetate 0,25 M – pH 5,2 with a change of gradient of the same buffer of 50 mM – pH 5,2. The electrophoresis in polyacrylamide gel (PAGE) revealed four enzymatic bands, the chromatography of ionic interchange revealed a peak with high enzymatic activity, in the eluted fraction without gradient, and two small peaks with low enzymatic activity in the fractions 102 – 107 and 116 – 119. The enzymatic extract without purifying showed little thermic stability, and its activity falls notoriously to 50°C. The total purified enzyme showed a KM of 12,8 mM and maximum velocity of 0,105 for “guayacol” and a KM of 2,22 mM and maximum velocity of 1,095 for hydrogen peroxide. The eluted chromatographic fraction without gradient, showed a KM and maximum velocity of 10,52 mM – 0,54 and 5 mM – 0,606 for “guayacol” and hydrogen peroxide. The optimum pH of the total purified enzyme was of 6 and 7 for the chromatographic fraction without gradient and also showed good stability to this pH. With respect to the immobilization process, it was found that the tied protein is of approximately 7 mg/g of support with a production of coupling of 79%. The yield of immobilization of the POD of turnip varies between 46,36 and 47,65% the amount of not immobilized enzymatic activity was around of 24,35%, with a loss of enzymatic activity during this process of immobilization around 29%. With respect to the capacity of removal of phenol by the present peroxidases in a raw extract of turnip, it was showed that the immobilized presents a 74% and the soluble POD a 66,66%, being mare effective the immobilized POD in the removal of phenol.
Keywords
Sistema acuoso residual, Compuestos fenólicos, Peroxidasa de brassica napus l, Eficacia, Remoción