Eecto in vitro de las endonucleasas de restricción extraídas de klebsiella pneumoniae sobre adn de plasmodium falciparum
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Date
2009
Authors
Becerra Gamboa, Jorge Víctor
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Volume Title
Publisher
Universidad Nacional de Trujillo
Abstract
El presente trabajo tiene como objetivo principal determinar la actividad de la endonucleasa de restricción de Klebsiella pneumoniae sobre el DNA plasmídico de Plasmodium falciparum. Para esto se realizó la extracción de la enzima a través de técnicas de sonicación y cambio de medios en la cepa bacteriana. El método utilizado para la obtención de plásmido se denomina lisis alcalina y se basa en la desnaturalización selectiva del DNA cromosómico mediante alcalinización con NaOH y adición de SDS (detergente), en condiciones en las que el DNA plasmídico permanece próximo a su estructura nativa, debido principalmente a su pequeño tamaño y su naturaleza circular y superenrollada. Finalmente, la enzima y el DNA fueron incubados para que se de la digestión de este último y se realizó un corrido cromatográfico en gel de agarosa. Los resultados obtenidos nos mostraron una clara actividad de la enzima sobre el ácido nucleico del parásito, mostrando varios puntos de corte. Estos puntos de corte obtenidos son equivalentes a las veces que se encuentra repetido el lugar de restricción a lo largo del plásmido
Description
This work has as principal goal to determine the activity of the restriction endonuclease of Klebsiella pneumoniae on the DNA plasmid of Plasmodium falciparum. The extraction of the enzyme was done by sonication and techniques of change media in the bacterial strain. The method used to obtain the plasmid is named alkaline lysis and is based on the selective desnaturation of DNA chromosomal by alkalinization with NaOH and addition of SDS (detergent), under conditions in which the plasmid DNA remains close to its native structure, because mainly to its small size and circular nature and supercoiling. Finally, the enzyme and DNA were incubated for the digestion of the latter was a run on agarose gel chromatography. The results showed a clear activity of the enzyme on the nucleic acid of the parasite, showing various cut points. These cutoff points earned are equivalent to the time which is the site of restraint repeated throughout the plasmid
Keywords
Klebsiella pneumoniae, Plásmido, Endonucleasa de restricción, Plasmodium falciparum