Aislamiento e identificación de cepas de levaduras con elevada capacidad de producción de biodiesel
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Date
2019
Authors
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Publisher
Universidad Nacional de Trujillo
Abstract
Se evaluó la viabilidad de aislar del ambiente cepas de levaduras con elevada capacidad de producción de aceite (biodiesel). Para ello, se tomaron muestras de suelo de cuencas (márgenes y bosques) de cuatro ríos con diferentes pisos altitudinales, ubicados en las regiones de La Libertad, Lambayeque, Ancash y Cajamarca. Éstas fueron incubadas en 50 mL de medio liquido enriquecido con glicerol (30ºC/80 rpm/48 h), y posteriormente se incubaron en medio selectivo para levaduras (30ºC/96 h). Las colonias obtenidas fueron repicadas en el mismo medio para obtener cultivos puros. Se evaluó la capacidad de producción (acumulación) de aceite y para ello, las levaduras fueron sembradas en un medio con déficit de nitrógeno C:N 100:1, donde las fuentes de carbono y nitrógeno fueron xilosa y sulfato de amonio respectivamente. Se aplicó el método de ultrasonido para el rompimiento de la pared celular de las levaduras y se usó etanol absoluto, cloroformo y éter de petróleo como solventes de lípidos. El cálculo de porcentaje de acumulación de lípidos se realizó mediante gravimetría. Se obtuvieron 3 colonias de levaduras que sobrepasaron el 20% de acumulación de aceite. La identificación molecular de las levaduras oleaginosas aisladas se realizó amplificando la región ITS (internal transcribed spacer), del ADN ribosómico conservado, usando los primers ITS1 e ITS4, y los productos amplificados se secuenciaron utilizando la técnica de Sanger. Se identificó Rhodotorula Kratochvilova, Rhodotorula glutinis y Rhodotorula mucilaginosa con una producción de biodiesel de 29,7%, 31,55% y 23,1% respectivamente. Se concluye que las 3 cepas de levaduras con elevada capacidad de producción de biodiesel se aislaron a partir de muestras de suelo tomadas de cuencas de ríos de las regiones de La Libertad y Cajamarca.
Description
The viability of isolating yeast strains with high oil production capacity (biodiesel) was evaluated from the environment. To do this, soil samples were taken from basins (margins and forests) of four rivers with different altitude levels, located in the regions of La Libertad, Lambayeque, Ancash and Cajamarca. These were incubated in 50 mL of glycerol-enriched liquid medium (30ºC / 80 rpm / 48 h), and subsequently incubated in selective medium for yeast (30ºC / 96 h). The single colonies were picked in the same medium to establish a pure culture. The production capacity (accumulation) of oil was evaluated, the yeast were inoculated in a medium with a C: N 100: 1 nitrogen deficit (carbon and nitrogen sources were xylose and ammonium sulfate respectively). Ultrasound method was used to disrupt cell walls and absolute ethanol, chloroform and petroleum ether were used as lipid solvents. The lipid accumulation was determined using the gravimetric method. The gravimetric results indicated that three pure cultures were able to accumulate over 20% of lipid substances in their cells. Molecular identification of oleaginous yeast isolates was done by amplifying the internal transcribed spacer (ITS) region of the conserved ribosomal DNA using primers ITS1 and ITS4 and this amplified ITS products were sequenced using the Sanger method. Rhodotorula Kratochvilova, Rhodotorula glutinis and Rhodotorula mucilaginosa were identified with a biodiesel production of 29.7%, 31.55% and 23.1% respectively. It is concluded that the 3 yeast strains with high biodiesel production capacity were isolated from soil samples taken from river basins in the regions of La Libertad and Cajamarca.
Keywords
Rhodotorula, levaduras oleaginosas, biodiesel