Efecto de la concentración de sustratos e inhibidores sobre la actividad de la peroxidasa de Brassica napus “nabo”
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Date
2012
Authors
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Publisher
Universidad Nacional de Trujillo
Abstract
Este trabajo fue realizado con el objeto de determinar la concentración de sustratos e inhibidores para Peroxidasa (POD) E.C. 1.11.1.7. de Brassica napus L. “nabo”. Para lo cual, esta enzima fue extraída de la raíz mediante licuextraccion, filtración y centrifugación; obteniéndose un extracto crudo de la enzima y manteniéndose en refrigeración. Una vez obtenida este extracto enzimático se determinaron las constantes cinéticas KM y Vmax para cada sustrato sin inhibidor, como son guayacol/H2O2 y pirogalol/ H2O2 y viceversa, midiéndose la actividad enzimática en cinco concentraciones diferentes para guayacol (5-30mM), pirogalol (15-55mM) y H2O2 (2-18 mM ante guayacol y 5-25 mM ante pirogalol). Las constantes cinéticas KM y Vmax fueron calculadas para cada sustrato con inhibidor, tales como acido etilendiaminotetracético (EDTA), metanol, citrato y pirofosfato. Las concentraciones estándar para cada inhibidor fueron calculadas y obtenidas por dilución, confrontándose y evaluándose con los sustratos antes mencionados. Todas las mediciones de absorbancia fueron obtenidas en un espectrofotómetro a una longitud de onda de 470 nm para guayacol y 415 nm para pirogalol, en un tiempo de dos minutos. Los valores de KM y Vmax fueron calculados mediante el software estadístico GraphPad Prims versión 6.00.271. Finalmente los resultados obtenidos muestran que los inhibidores afectan la actividad enzimática de la peroxidasa y por tanto las constantes cinéticas, aumentando el KM y disminuyendo la Vmax en la mayoría de las reacciones evaluadas frente a los sustratos.
Description
Keywords
Vmax, Inhibidor, Km, Peroxidasa (pod)